
==== Front
Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban
Zhejiang Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban
ZJYB
Journal of Zhejiang University (Medical Sciences)
1008-9292
《浙江大学学报》编辑部 杭州市天目山路148号浙江大学西溪校区浙江大学出版社415室

39183060
1008-9292(2024)04-0481-09
10.3724/zdxbyxb-2024-0063
2024-0063
R737.9
X18
a
Original Articles
十溴联苯醚暴露通过胞外囊泡装载miR-221促进三阴性乳腺癌细胞转移
Decarbromodiphenyl ether exposure promotes migration of triple-negative breast cancer cells through miR-221 in extracellular vesicleshttp://orcid.org/0009-0008-0242-7784
江 孟晓 JIANG Mengxiao
王 丽珍 WANG Lizhen
卢 林明 LU Linming
童 有华 TONG Youhua
李 艳宇 LI Yanyu
http://orcid.org/0000-0003-4522-4414
支 慧 ZHI Hui
皖南医学院病理解剖教研室，安徽 芜湖 241002
Department of Pathology, Wannan Medical College Wuhu 241002, Anhui Province, China
余 方
沈 敏
支 慧，副教授，硕士生导师，主要从事污染物毒理研究；E-mail： zhi_hui01@hotmail.com；https：//orcid.org/0000-0003-4522-4414
ZHI Hui, E-mail: zhi_hui01@hotmail.com, https://orcid.org/0000-0003-4522-4414
江孟晓，硕士研究生，主要从事环境污染和健康相关研究；E-mail：xiaoxiaoxiao203@163.com；https：//orcid.org/0009-0008-0242-7784

25 8 2024
53 4 294 481489
29 2 2024
04 6 2024
2024
The Author(s)
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ This is an open access article under the CC BY-NC-ND 4.0 License (https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/)
目的

探讨环境污染物十溴联苯醚（BDE-209）暴露促进三阴性乳腺癌（TNBC）恶性进展的机制。

方法

将TBNC细胞分为空白对照组和BDE-209暴露组。超速离心法提取胞外囊泡，分别应用扫描电子显微镜和蛋白质印迹法对提取的胞外囊泡进行鉴定，采用纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡生成量，细胞划痕实验和Transwell小室实验检测与胞外囊泡共培养后TNBC细胞的迁移能力和扩散能力，定量逆转录PCR（qRT-PCR）检测囊泡中的miR-221表达水平，蛋白质印迹法检测共培养后TNBC细胞中基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达水平。

结果

与空白对照组比较，2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露可显著增加胞外囊泡的生成（均P<0.05），其中200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率较空白对照组提高86%，穿膜细胞数提高至1.32倍，miR-221表达水平提高至2.71倍，MMP9表达水平提高至1.62倍（均P<0.05）。转染抗miR-221抗体能降低BDE-209暴露诱导生成的胞外囊泡内miR-221表达水平，使BDE-209促进MDA-MB-231细胞迁移的能力被显著抑制。

结论

BDE-209暴露可通过增加胞外囊泡的生成及装载miR-221增强TNBC细胞的迁移能力，促进TNBC细胞转移。

Objective

To investigate the effect of decarbromodiphenyl ether (BDE-209) exposure on the migration ability of triple-negative breast cancer (TNBC) cells and to explore the underlying mechanism.

Methods

Human TNBC MDA-MB-231 cells were divided into blank control group and BDE-209 exposure groups (treated with 0.02, 0.20, 2.00, 20.00 and 200.00 ng/mL BDE-209 in high glucose DMEM). Extracellular vehicles (EVs) secreted by MDA-MB-231 cells were isolated by differential ultracentrifugation. Transmission electron microscopy (SEM), nanoparticle tracking analysis (NTA) and Western blotting were performed to characterize the EVs. The effect of the EVs induced by BDE-209 exposure (EVs-BDE-209) on the migration and invasion of MDA-MB-231 cells was detected by wound-healing assay and Transwell test. qRT-PCR was used to measure the miR-221 level in EVs-BDE-209. The expression of MMP9 in MDA-MB-231 cells was determined by Western blotting.

Results

Compared with the blank control, BDE-209 exposure increased the tumor cell-derived EVs in dose-dependent manner. The MDA-MB-231 cells co-cultured with EVs released by 200.00 ng/mL BDE-209 exposure showed an 86% increase in cell migration rate, a 1.32-fold higher number of membrane-penetrating cells, a 2.71-fold higher expression level of miR-221, and a 1.62-fold higher expression level of MMP9 compared with the blank control group (all P<0.05). While transfection with anti-miR-221 antibody to decrease miR-221 level in EVs significantly reversed the increased invasion ability of the MDA-MB-231 cells treated with EVs-BDE-209.

Conclusion

BDE-209 exposure may promote metastasis potential of MDA-MB-231 cells via EVs-BDE-209 transmitted miR-221.

十溴联苯醚
三阴性乳腺癌
胞外囊泡
细胞迁移
微RNA-221
基质金属蛋白酶9
Decarbromodiphenyl ether
Triple-negative breast cancer
Extracellular vesicles
Cell migration
MicroRNA-221
Matrix metalloprotein 9
国家自然科学基金21906122 芜湖市科技局科研项目2022jc32 皖南医学院校级重点项目WK2020Z13
==== Body
pmcTNBC是雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2表达均为阴性的一类乳腺癌，约占乳腺癌的20%［1］，其患者的转移复发率明显高于其他类型乳腺癌患者［2］，因此受到广泛关注。深入研究TNBC的发病机制和发展新的治疗模式，对降低TNBC所带来的社会经济负担、促进人民健康和社会和谐具有重要意义。

既往研究证实，环境污染物暴露不仅与雌激素受体阳性乳腺癌的发生有关，也是导致TNBC发生的重要因素之一［3-4］。BDE-209是一种含有10个溴原子的芳香族化合物，作为阻燃剂添加于多类生活用品中，在全球范围内大量使用。流行病学调查结果显示，BDE-209在人体中含量较高［5］，不仅在乳汁、血液中可检测到，在乳腺的脂肪组织中也有大量蓄积［6-7］。He等［8］发现乳腺癌患者脂肪组织中的BDE-209含量显著高于健康人群，提出BDE-209暴露是乳腺癌发生的危险因素。BDE-209暴露（远高于其在人体的最高暴露浓度）可通过抑制乳腺癌细胞的凋亡促进乳腺癌的发生［9］，且这一毒性效应在使用雌激素受体抑制剂后会被显著减弱［10］。由于TNBC细胞表面无雌激素受体，BDE-209暴露对TNBC肿瘤细胞是否有效应尚不清楚。

TNBC患者预后差与TNBC细胞迁移能力较强有关［11-12］。研究证实，TNBC细胞可借助其释放的胞外囊泡，与周围细胞进行信号传导，促进TNBC细胞的迁移［13］。前期研究结果表明，以人体暴露浓度的BDE-209暴露于TNBC细胞不能促进TNBC细胞的增殖，但可以增强TNBC细胞的迁移能力［14］。BDE-209暴露是否会通过影响TNBC肿瘤细胞释放胞外囊泡从而促进TNBC细胞的迁移尚不清楚。胞外囊泡是由脂质双分子层围成的囊泡结构，其内含多种蛋白、脂类和核酸。miRNA作为胞外囊泡携带的遗传信息，可促进TNBC的恶性进展［15-16］。研究证实，肿瘤细胞可以借助胞外囊泡将装载的miR-221传递给受体细胞，增强受体细胞的转移能力［17-18］。新近研究发现，与BDE-209具有相似化学结构的多氯联苯醚暴露可以影响miR-221表达［19］。那么，可以诱导miR-21、miR-141等miRNA表达改变［20-21］的BDE-209暴露是否能引起胞外囊泡内携带的miR-221表达水平发生改变？本文通过研究BDE-209暴露对TNBC细胞释放胞外囊泡的影响，初步探讨BDE-209暴露对促进TNBC转移的作用及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

BDE-209（纯度为95.9%）为德国Dr.Ehrenstorfer公司产品，用二甲基亚砜溶解至浓度为2 mmol/L，使用前以培养基稀释至实验浓度。TNBC细胞株MDA-MB-231购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心；高糖DMEM和0.25%胰蛋白酶为美国Gibco公司产品；胎牛血清为乌拉圭Lonsera公司产品；MMP9抗体为美国R&D公司产品；GAPDH抗体为上海碧云天生物技术股份有限公司产品；CD63抗体为美国Abcam公司产品；抗miR-221为吉玛基因公司产品；Transwell小室为美国Corning公司产品；TRIzol为北京全式金生物技术有限公司产品；cDNA逆转录试剂盒和定量PCR检测试剂盒为南京诺唯赞生物科技股份有限公司产品；Lipo3000转染试剂为美国Invitrogen公司产品；ECL化学发光液为美国Thermo公司产品。

纳米颗粒跟踪分析仪ZetaView为德国Particle Metrix公司产品；SNE-4500M-Plus扫描电子显微镜为韩国赛可有限公司产品；BioTek Cytation 5细胞成像多功能检测系统为美国Agilent公司产品；荧光定量PCR仪为美国Bio-Rad公司产品；Optima MAX-TL台式超速离心机为美国Beckman公司产品。

1.2 超速离心法提取TNBC细胞胞外囊泡

将TNBC细胞株MDA-MB-231制备成浓度为2×106/mL的细胞悬液。将细胞悬液加入T75细胞培养瓶，分为空白对照组和BDE-209组，于37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养24 h。

根据BDE-209在职业暴露人群血液中的含量（约为200 ng/mL）［21］，将BDE-209的实验浓度定为0.02、0.20、2.00、20.00和200.00 ng/mL。将加入不同浓度BDE-209后的BDE-209组及空白对照组细胞再培养24 h。收集培养液，4 ℃、800×g离心5 min；收集上清液，再于4 ℃、2000×g离心10 min；收集离心后的上清液，于4℃、100 000×g离心120 min，沉淀即为胞外囊泡。以100 μL PBS重悬胞外囊泡。

1.3 低表达miR-221的胞外囊泡的制备和收集

MDA-MB-231细胞种于T75细胞培养瓶内，将稀释后的Lipo3000与抗miR-221抗体混匀，室温静置20 min后加入培养瓶内，在37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养6 h后，将培养液更换为无外泌体血清的完全培养基，继续置于37℃、5%二氧化碳培养箱中培养24 h后，在培养液中加入200.00 ng/mL BDE-209，24 h后收集培养液，以差速超速离心法提取胞外囊泡。

1.4 扫描电子显微镜观察胞外囊泡特征

取10 μL胞外囊泡悬液滴加在硅片上，自然干燥后在样品以及样品托表面同时喷镀一层金属膜，以改善生物样品的导电性。将硅片置于扫描电子显微镜下观察并标注胞外囊泡粒径。

1.5 蛋白质印迹法检测胞外囊泡标记蛋白CD63

将提取的胞外囊泡用RIPA裂解提取蛋白。待蛋白转至PVDF膜后，以5% BSA封闭，再加入CD63抗体（1∶1000）4 ℃过夜孵育，冲洗后加入辣根过氧化物酶标记二抗（1∶5000），室温孵育1 h后冲洗干净。PVDF膜上滴加ECL化学发光液显影，使用成像仪对发光信号胞外囊泡表面CD63的表达进行可显影分析，用Image J软件对条带进行灰度值分析。

1.6 纳米颗粒跟踪技术检测胞外囊泡浓度

设定测试参数，洗清纳米颗粒跟踪分析仪样品池，用新鲜配制的粒径为100 nm的微球悬浮液对纳米颗粒跟踪分析仪进行调试。调试完毕后，将PBS稀释10倍后的胞外囊泡用1 mL无菌注射器匀速推入分析仪的样品室，检测胞外囊泡的浓度。

1.7 细胞划痕实验检测TNBC细胞迁移能力

将2×105个MDA-MB-231细胞加入六孔板中，待细胞融合度达80%后加入1×108个胞外囊泡，48 h后弃培养液后于板底划平行线造成伤口，PBS清洗三次后拍照。然后在37 ℃、5%二氧化碳培养箱中培养24 h并拍照记录。

1.8 Transwell小室实验检测TNBC细胞迁移能力

将2×105个MDA-MB-231细胞加入六孔板中，待细胞融合度达80%后加入1×108个胞外囊泡；48 h后将生长状态良好的MDA-MB-231细胞消化离心，并用完全培养基重悬至细胞密度为6×105/mL。取200 μL细胞悬液加入预铺基质胶的上室，下室加入培养液，放入37 ℃、5%二氧化碳培养箱中分别培养24 h后取出小室，使用PBS清洗两次，甲醇固定10 min，结晶紫染色5 min后拍照并计数。

1.9 qRT-PCR法检测胞外囊泡中miR-221表达

TRizol提取各组胞外囊泡（1×108个）总RNA，以逆转录试剂盒进行逆转录合成cDNA。miRNA逆转录时采用茎环法，茎环引物由通用生物公司合成。使用qRT-PCR检测miR-221和内参U6的表达水平，并采用2－ΔΔCt法进行定量分析。引物序列：miR-221-5p正向引物为5 ´ -CGCAGCCTGGCATACAATG-3 ´ ，反向引物为5 ´ -AGTGCGTGTCGTGGAGTCG-3 ´ ；U6正向引物为5 ´ -CGATACAGAGAAGATTAGCATGGC-3 ´ ，反向引物为5 ´ -AACGCTTCACGAATTTGCGT-3 ´ 。反应条件：95 ℃ 30 s、95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s，进行40个循环，所有反应独立重复三次。

1.10 蛋白质印迹法检测TNBC细胞MMP9表达

将MDA-MB-231细胞接种于T75细胞培养瓶，对各组细胞采用200.00 ng/mL BDE-209进行暴露，24 h后收集胞外囊泡；将1×108个胞外囊泡加入已铺有MDA-MB-231细胞的六孔板，培养48 h，裂解细胞提取蛋白后转至PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭1 h，按1∶1000比例加入GAPDH、MMP9抗体，4 ℃孵育过夜；洗净后，按加入辣根过氧化物酶标记二抗（1∶5000），室温下孵育1 h，洗膜后用ECL化学发光试剂盒进行曝光，显影。

1.11 统计学方法

采用OringinPro 8.0软件处理结果，符合正态分布的定量资料以均数±标准差（ x¯ ±s）表示，组间比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNBC细胞来源的胞外囊泡分离鉴定

纳米颗粒跟踪分析仪检测结果显示，差速高速离心提取的胞外囊泡分散较好，大小均匀，以单峰形式出现（图1A和图2）。扫描电子显微镜结果显示囊泡直径为130~170 nm（图1B）。蛋白质印迹法检测结果表明，提取到的胞外囊泡表达CD63（图3）。提示从TNBC细胞培养液成功分离得到胞外囊泡。

图1 三阴性乳腺癌细胞来源的胞外囊泡图像

Figure 1 Extracellular vesicles derived from triple negative breast cancer cells

A：纳米颗粒跟踪分析仪下胞外囊泡图像；B：扫描电子显微镜下胞外囊泡图像.胞外囊泡呈圆形结构，粒径为130~170 nm.

图2 胞外囊泡的粒径分布

Figure 2 Particle size distribution of extracellular vesicles

图3 胞外囊泡标志物CD63蛋白电泳图

Figure 3 Electrophoretogram of the extracellular vesicles marker CD63

BDE-209：十溴联苯醚；CD：分化抗原；GAPDH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶.

2.2 BDE-209暴露促进TNBC细胞胞外囊泡生成

将MDA-MB-231细胞暴露于不同浓度BDE-209并培养24 h后发现，与空白对照组比较，2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209暴露后胞外囊泡的生成量显著增加（均P<0.05），CD63表达水平也显著增加（均P<0.05），见表1。结果提示，BDE-209暴露显著增加了TNBC细胞释放的胞外囊泡数。

表1 各组MDA-MB-231细胞胞外囊泡数和CD63相对表达水平比较

Table 1 Comparison of the number of extracellular vehicles and CD63 relative expression levels between BDE-209 groups and the control group

组 别	n	胞外囊泡数

（×108/mL）

	CD63相对表达水平	
空白对照组	6	1.17±0.10	1.00±0.00	
BDE-209组 0.02 ng/mL	6	1.29±0.14	1.17±0.12	
0.20 ng/mL	6	1.32±0.16	1.12±0.13	
2.00 ng/mL	6	1.58±0.23*	1.81±0.11*	
20.00 ng/mL	6	2.59±0.39*	2.12±0.10*	
200.00 ng/mL	6	3.72±0.42*	2.79±0.14*	
与空白对照组比较，* P<0.05. BDE-209：十溴联苯醚.

x¯ ±s

2.3 BDE-209暴露诱导胞外囊泡促进TNBC细胞迁移

将MDA-MB-231细胞暴露于200.00 ng/mL BDE-209培养24 h，将提取的胞外囊泡与MDA-MB-231细胞共培养48 h。结果显示，与空白对照组比较，200.00 ng/mL BDE-209暴露诱导释放的胞外囊泡共培养的细胞迁移率提高了86%（P<0.05），穿膜细胞数提高至1.32倍（P<0.05），见图4和表2。结果提示，BDE-209暴露后TNBC细胞释放的胞外囊泡能显著促进TNBC细胞的迁移能力。

图4 各组细胞划痕实验和Transwell小室实验结果比较

Figure 4 Comparison of the wound-healing assay and Transwell test in three groups

与空白对照组比较，BDE-209组迁移细胞划痕的愈合速度增加，迁移细胞数增加.与BDE-209组比较，抗miR-221组迁移细胞划痕的愈合速度减缓，迁移细胞数减少. BDE-209：十溴联苯醚.

表2 各组相对迁移率和穿膜细胞数比较

Table 2 Comparison of the migration rate and transmem-brane cell numbers in three groups

组 别	n	相对迁移率	穿膜细胞数	
空白对照组	6	1.00±0.03*	238±14*	
BDE-209组	6	1.86±0.13	314±26	
抗miR-221组	6	1.12±0.11*	261±26*	
与BDE-209组比较，* P<0.05. BDE-209：十溴联苯醚；miR：微RNA.

x¯ ±s

2.4 BDE-209暴露增加胞外囊泡内miR-221，进而促进TNBC细胞MMP9表达

0.02、0.20、2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209组胞外囊泡内miR-221表达水平分别为空白对照组的0.95、1.02、1.46、2.05和2.71倍，2.00、20.00和200.00 ng/mL BDE-209组胞外囊泡内miR-221表达均高于空白对照组（均P<0.05），其中200.00 ng/mL BDE-209组胞外囊泡中miR-221表达水平是空白对照组的2.7倍。MMP9蛋白电泳结果见图5，200.00 ng/mL BDE-209组MMP9表达水平为空白对照组的1.62倍（两组分别为1.00±0.04和1.62±0.23，P<0.05）。提示BDE-209暴露通过提高胞外囊胞内装载的miR-221，促进吞噬胞外囊泡的TNBC细胞表达MMP9，进而增加TNBC细胞的迁移能力。

2.5 抑制miR-221表达有效减弱BDE-209促进TNBC细胞迁移能力

细胞划痕实验结果表明，抑制miR-221表达显著抑制了细胞汇合；Transwell实验结果亦显示，相较于BDE-209组，抑制miR-221表达后细胞穿膜数明显减少（P<0.05），见图4和表2。提示抑制胞外囊泡装载的miR-221可显著减弱BDE-209暴露诱导TNBC细胞释放的胞外囊泡对TNBC细胞迁移能力的促进。

图5 两组MDA-MB-231细胞内MMP9蛋白电泳图

Figure 5 Electrophoretogram of MMP9 in the MDA-MB-231 cells exposed to BDE-209 or not

BDE-209：十溴联苯醚；MMP：基质金属蛋白酶；GAPDH：甘油醛-3-磷酸脱氢酶.

3 讨论

持久性有机污染物指人类合成的能持久存在于环境中、通过生物食物链（网）累积、并对人类健康造成有害影响的化学物质，其主要包括多氯联苯、多氯代苯并二噁英、有机氯农药及多溴联苯醚。研究显示，持久性有机污染物暴露可以促进TNBC的发生发展，如多氯联苯能通过激活ROCK提高TNBC细胞的迁移能力［22］；四氯二苯并二噁英暴露可提高TNBC细胞的干性特征，从而提高TNBC细胞的转移能力［23］。BDE-209是人体中含量较高的一种持久性有机污染物，能促进雌激素受体阳性表达的乳腺癌细胞的增殖［9］，但对于雌激素受体阴性的TNBC细胞是否有影响研究尚少。

TNBC是最具侵袭性的乳腺癌亚型，这与TNBC细胞较强的迁移能力密切相关。研究发现，肿瘤细胞源性胞外囊泡可被肿瘤细胞吞噬，从而参与调控肿瘤细胞的转移［24］。胞外囊泡是由细胞分泌释放的具有脂质双分子层的纳米级囊泡，具有较强的自分泌和旁分泌生物学活性。既往研究发现，TNBC细胞源性胞外囊泡可以基于提高肿瘤细胞迁移、增加肿瘤微环境中血管新生等多方面促进TNBC的恶性发展［25］。研究显示，持久性有机污染物暴露可以诱发胞外囊泡的释放，如BDE-47暴露可以显著增加巨噬细胞释放胞外囊泡［26］；BDE-209暴露可以促进黑色素瘤细胞释放胞外囊泡［27］。胞外囊泡的生物发生有三个关键节点：出芽形成腔内囊泡、阻止囊泡降解、囊泡与细胞膜融合。新近研究证实，受体酪氨酸激酶家族的EGFR表达可以通过磷酸化RAB31促进腔内囊泡的出芽，最终诱发胞外囊泡的释放［28］，而多溴二苯醚暴露可以促进EGFR的表达［29］。由此，推测BDE-209的暴露对于TNBC细胞胞外囊泡的衍生也会有影响。本文资料显示，TNBC细胞在人体暴露浓度的BDE-209下暴露24 h，其胞外囊泡释放显著增加。这一结果与之前的研究报道一致。进一步研究发现，吞噬了BDE-209暴露诱导胞外囊泡的TNBC细胞迁移能力显著提升。这一结果表明，BDE-209暴露可以通过胞外囊泡促进TNBC恶性发展。

胞外囊泡携带多种与母体细胞一致的物质，如蛋白质、脂质、核酸。miRNA是一类非编码小片段核糖核酸，通过调节基因的表达及蛋白合成，参与调控肿瘤发生发展等病理生理进程［30］。研究发现，肿瘤细胞衍生的胞外囊泡可以通过携带miRNA调控肿瘤细胞的迁移能力［31］。miR-221位于染色体Xp11，3，是定义明确的原癌基因族，可通过调控TNBC细胞的转移和对化疗药物的耐受促进TNBC的恶性进展［32］。抑制miR-221在TNBC细胞内表达可以有效提高紫杉醇的治疗效果［33］。肿瘤细胞释放的胞外囊泡中亦有miR-221的表达。如在胰腺癌细胞Panc-1、结肠癌细胞HCT116等释放的胞外囊泡中均可检测到miR-221高表达［34-35］，且吞噬了装载大量miR-221胞外囊泡的肿瘤细胞的转移能力有明显提高［36］。TNBC细胞释放的胞外囊泡里亦有miR-221的高表达［37］。前期研究发现，BDE-209暴露可以诱导miRNA在细胞内表达的改变，但BDE-209暴露是否可以引起胞外囊泡内miRNA表达异常？本文资料显示，BDE-209暴露后TNBC细胞释放的胞外囊泡中miR-221表达水平有显著升高，且呈现剂量依赖性。进一步研究发现，降低胞外囊泡中的miR-221水平，BDE-209暴露后TNBC细胞胞外囊泡促进细胞转移的能力被明显抑制。

机制研究结果显示，高表达miR-221可以与目标mRNA结合，影响多个信号通路，如miR-221可以激活Wnt信号通路，提高肿瘤细胞的迁移能力，从而促进肿瘤的恶性发展［38］。新近研究发现，miR-221可结合SOCS3的3 ´ 端，抑制SOCS3的表达及其对STAT3信号通路的抑制效应，提高STAT3的表达及其磷酸化，增加MMP9的表达，促进肿瘤的浸润发展［39-40］。本文资料显示，吞噬了被BDE-209暴露的TNBC细胞释放的胞外囊泡后，TNBC细胞内的MMP9表达水平明显升高。结合BDE-209暴露可激活STAT3信号通路机制［14］，推测BDE-209暴露诱导TNBC细胞释放的胞外囊泡可以将高表达miR-221的胞外囊泡传递给受体细胞，激活受体细胞的STAT3，促进MMP9表达，增强肿瘤细胞转移的能力。

综上所述，本文资料阐明BDE-209暴露可通过促进TNBC细胞释放大量胞外囊泡，增强TNBC细胞的迁移能力，其作用机制与胞外囊泡中高表达的miR-221密切相关。这一结果揭示了BDE-209长期暴露导致的生物学毒性特征，丰富了我们对BDE-209环境健康风险的认识，为新污染物的管控提供了支持。

研究得到国家自然科学基金（21906122）、芜湖市科技局科研项目（2022jc32）、皖南医学院校级重点项目（WK2020Z13）等支持

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (21906122), Research Project of Wuhu Science and Technology Bureau (2022jc32) and Key Program of Wannan Medical College (WK2020Z13)

利益冲突声明

所有作者均声明不存在利益冲突

Conflict of Interests

The authors declare that there is no conflict of interests

［缩略语］

三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）；十溴联苯醚（decarbromodiphenyl ether，BDE-209）；微RNA（microRNA，miRNA，miR）；基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）；分化抗原（cluster of differentiation，CD）；互补DNA（complementary DNA，cDNA）；聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）；增强化学发光（enhanced chemiluminescence，ECL）；磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）；聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）；定量逆转录PCR（quantitative reverse transcription PCR，qRT-PCR）；表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）；细胞因子信号转导抑制因子（suppressors of cytokine signaling，SOCS）；信号转导及转录激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）
==== Refs
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